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常用培养基简介

发布时间: 2021-10-26  点击次数: 1241次

                                                                   常用培养基

                                                     检硕科学器材(上海)有限公司

一、糖发酵管成分:牛肉膏 5克,蛋白胨 10克,氯化钠 3克,磷酸氢二钠  2克,0.2%滇麝香草酚蓝溶液 12毫升,蒸馏水 1000毫升,PH 7.4制法1. 葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121摄氏度高压灭菌15分钟。2. 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶1000 毫升,121摄氏度高压灭菌15分钟。另将各种糖类分别配好10%溶液,同时高压灭菌。将5毫升糖溶液加入于100 毫升培养基内,以无菌操作分装小试管。注:蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌。 试验方法:从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于36摄氏度±1摄氏度培养,一般观察2~3d。迟缓反应需观察14~30d。 

 二、乳糖胆盐发酵管成分:蛋白胨 20克,猪胆盐(或牛、羊胆盐)5克,乳糖 10克,0.04%滇甲酚紫水溶液 25毫升,蒸馏水 1000毫升制法:将蛋白胨,胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装每管10 毫升,并放入一个小倒管,115摄氏度高压灭菌15分钟。注:双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。 

 三、5%乳糖发酵管成分:蛋白胨 0.2克,氯化钠 0.5克,乳糖 5克,2%溴麝香草酚蓝水溶液 1.2毫升,蒸馏水 100毫升,pH 7.4制法:除乳糖以外的各成分:溶解于50毫升蒸馏水内,校正pH。将乳糖溶解于另外50毫升蒸馏水内,分别灭菌121 摄氏度 15分钟,将两液混合,以无菌操作分装于灭菌小试管内。注:在此培养基内,大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于ld内发酵。 

 四、缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)成分:磷酸氢二钾 5克,多胨 7克,葡萄糖 5克,蒸馏水 1000毫升制法:溶化后校正pH,分装试管,每管1毫升 ,121摄氏度高压灭菌15分钟。甲基红(MR)试验:自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中,于36±1摄氏度培养2~5d,哈夫尼亚菌则应在22~25摄氏度培养。滴加甲基红试剂一滴,立即观察结果。鲜红色为阳性,黄色为阴性,甲基红试剂配法:10毫克甲基红溶于30毫升95%乙醇中,然后加入20 毫升蒸馏水。V-P试验:用琼脂培养物接种本培养基中,于36±1摄氏度培养2~4d。哈夫尼亚菌则应在22~25摄氏度培养。加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5毫升和40%氢氧化钾溶液0.2毫升充分振摇试管,观察结果阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性,应放在36±1摄氏度下培养4h再进行观察。 

五、营养明胶成分:蛋白胨 5克,牛肉膏 3克,明胶 120克,蒸馏水 1000毫升,pH 6.8~7.0制法:加热溶解,校正至pH7.4~7.6,分装小管,121摄氏度高压灭菌10分钟,取出后迅速冷却,使其凝固,复查最终pH应为6.8~7.0。试验方法:用琼脂培养物穿刺接种,放在22~25摄氏度培养,每天观察结果,记录液化时间。或放在36士1摄氏度培养,每天取出,放冰箱内30分钟后再观察结果。

 六、苯丙氨酸培养基成分:酵母浸膏 3克,DI-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸1克)2克,磷酸氢二钠 1克,氯化钠 5克,琼脂 12克,蒸馏水 1000毫升制法:加热溶解后分装试管,121摄氏度高压灭菌15分钟,使成斜面。试验方法:自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂,在36士1摄氏度培养4h或18~24h,滴加10%三氯化铁溶液2~3滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。 

七、蛋白胨水(靛基质试验用)成分:蛋白胨(或胰蛋白胨)20克,氯化钠 5克,蒸馏水 1000毫升,pH7.4制法:按上述成分配制,分装小试管,121摄氏度高压灭菌15分钟。靛基质试剂柯凡克试剂:将5克对二甲氨基溶解于75毫升戊醇中,然后缓慢加入浓盐酸25毫升。欧-波试剂:将1克对二甲氨基溶解于95毫升95%乙醇内,然后缓慢加入浓盐酸20 毫升。试验方法:挑取小量培养物接种,在36士1摄氏度培养1~2d,必要时可培养4~5d。加入柯凡克试剂约0.5毫升,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色;或加入欧-波试剂约0.5 毫升,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。注:蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用。 

八、硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)成分:牛肉膏 3克,酵母浸膏 3克,蛋白胨 10克,硫酸亚铁 0.2克,硫代硫酸钠 0.3克,氯化钠 5克,琼脂 12克,蒸馏水 1000 毫升制法:加热溶解,校正pH,分装试管,115摄氏度高压灭菌15分钟,取出直立候其凝固。试验方法:挑取琼脂培养物,沿管壁穿刺,于36士1摄氏度培养1~2d,观察结果。产硫化氢者使培养基变为黑色。注:肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生,应采用三糖铁琼脂或本培养基。  

九、尿素琼脂成分:蛋白胨 1克,氯化钠5克葡萄糖1克,,4%酚红溶液 3 毫升,琼脂 20克,蒸馏水 1000 毫升,20%尿素溶液 100毫升制法:将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正pH,加入琼脂,加热溶化并分装烧瓶。121摄氏度高压灭菌15分钟。冷至50~55摄氏度,加入经除菌过滤的尿素溶液,尿素的最终浓度为2%,最终pH应为7.2±0.1.分装于灭菌试管内,放成斜面备用。试验方法:挑取琼脂培养物接种,在36士1摄氏度培养24h,观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。 

十、(KCN)培养基成分:蛋白胨10克,氯化钠 5克,,磷酸氢二钠 5.64克,蒸馏水 1000 毫升,0.5%溶液 20 毫升,pH 7.6制法:将除以外的成分配好后分装烧瓶,121摄氏度高压灭菌15分钟。放在冰箱内使其充分冷却。每100 毫升培养基加入0.5%溶液2.0毫升(最后浓度为1:10000),分装于12mm*100mm灭菌试管,每管约4毫升,立刻用灭菌橡皮塞塞紧,放在4摄氏度冰箱内,至少可保存两个月。同时,培养基作为对照培养基,分装试管备用。 

十一、营养琼脂成分:蛋白胨10克,牛肉膏3克,氯化钠5克,琼脂15~20克,蒸馏水1000毫升制法:将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入15%氢氧化钠溶液约2毫升,校正pH至7.2~7.4。加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化分装烧瓶,121摄氏度高压灭菌15分钟。注:此培养基可供一般细菌培养之用,可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数,琼脂量为1.5%;如作成平板或斜面,则应为2%。  

十二、营养肉汤成分:蛋白胨 10克,牛肉膏 3克,氯化钠 5克,蒸馏水 1000毫升,pH7.4制法:按上述成分混合,溶解后校正pH,分装烧瓶,每瓶225 毫升 ,121摄氏度高压灭菌15分钟。 

十三、缓冲蛋白胨水(BP)成分:蛋白胨 10克,氯化钠 5克,磷酸氢二钠 1.5克,蒸馏水1000毫升,pH 7.2制法:按上述成分配好后以大烧瓶装,121摄氏度高压灭菌15分钟。临用时无菌分装每瓶225毫升。注:本培养基供沙门氏菌前增菌用。注:本培养基供沙门氏菌前增菌用。 

十四、EC肉汤成分:胰蛋白胨 20克,3号胆盐(或混合胆盐)1.5克,乳糖 5克,磷酸氢二钾 4克 1.5克,氯化钠 5克,蒸馏水 1000毫升制法:将上述成分混合,溶解后,分装有发酵倒管的试管中,121摄氏度高压灭菌15分钟。最终pH为6.9±0.2。 

十五、四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)基础培养基多胨或眎胨 5克,胆盐 1克,碳酸钙 10克,硫代硫酸钠 3克,蒸馏水 1000毫升,碘溶液 碘 6克,碘化钾 5克,蒸馏水 20 毫升制法:将基础培养基的各成分加入蒸馏水中,加热溶解,分装每瓶100毫升。分装时应随时振摇,使其中的碳酸钙混匀,121摄氏度高压灭菌15分钟备用。临用时每100毫升基础培养基中加入碘溶液2毫升,,0.1%煌绿溶液1毫升。 

十六、盐胱氨酸增菌液(SC)成分:蛋白胨 5克,乳糖 4克,磷酸氢二钠 5.5克,L-胱氨酸 0.01克,蒸馏水 1000毫升1% L-胱氨酸-氢氧化钠溶液的配法:称取L-胱氨酸0.1克或(DL-胱氨酸0.2克),加1mol/L氢氧化钠1.5毫升,使溶解,再加入蒸馏水8.5毫升即成。制法和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900毫升蒸馏水中,加热煮沸,候冷备用。溶解于100毫升蒸馏水中,加热煮沸,候冷,以无菌操作与上液混合。再加入1% L-胱氨酸-氢氧化钠溶液1毫升。分装于灭菌瓶中.每瓶100毫升,pH应为7.0±0.1。 

十七、亚硫酸铋琼脂(BS)成分:蛋白胨 10克,牛肉膏 5克,葡萄糖 5克,硫酸亚铁 0.3克,磷酸氢二钠 4克,煌绿 0.025克,柠檬酸铋铵 2克,亚硫酸钠 6克,琼脂 18~20克,蒸馏水 1000毫升,pH 7.5制法:1.将前面5种成分溶解于300毫升蒸馏水中。2将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50毫升蒸馏水溶解。3将琼脂于600毫升蒸馏水中煮沸溶解,冷至80摄氏度。4将以上三液合并,补充蒸馏水至1000毫升,校正pH,加0.5%煌绿水溶液5毫升,摇匀,冷至50~55摄氏度,倾注平皿。注:此培养基不需高压灭菌。制备过程不宜过分加热,以免降低其选择性。应在临用前一天制备,贮存于室温暗处,超过48h不宜使用。  

十八、三糖铁琼脂(TSI)成分:蛋白胨 20克,牛肉膏 5克,乳糖 10克,蔗糖 10克,葡萄糖 1克,氯化钠 5克,硫酸亚铁铵 0.2克,硫代硫酸钠 0.2克,琼脂 12克,酚红 0.025克,蒸馏水 1000 毫升,pH 7.4 制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH,加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5 毫升,摇匀,分装试管。装量宜多些,以便得到较高的底层。121摄氏度高压灭菌15分钟,放置高层斜面备用。

 十九、三糖铁琼脂换用方法成分:蛋白胨15克,眎胨5克,牛肉膏 3克,酵母膏 3克,乳糖 10克,蔗糖 10克,葡萄糖 1克,氯化钠 5克,硫酸亚铁 0.2克,硫代硫酸钠 0.3克,琼脂 12克,酚红 0.025克,蒸馏水 1000 毫升,pH7.4制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH,加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5 毫升,摇匀,分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层。121摄氏度高压灭菌15分钟,放置高层斜面备用。

 二十、嗜盐性试验培养基成分:蛋白胨2克,氯化钠 按不同量加,蒸馏水100 毫升,pH7.7制法:配制2%蛋白胨水,校正pH,共配制5瓶,每瓶100毫升。每瓶分别加入不同量的氯化钠:(1)不加;(2)3克;(3)7克;(4)9克;(5)11克。待溶解后分装试管,121摄氏度高压灭菌15分钟。

                                                                                                                                           本篇转载至实验之家

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